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        mCheery Nanobody Agarose Beads
        • 產品貨號:
          BN20547
        • 中文名稱:
          mCheery Nanobody Agarose Beads
        • 品牌:
          Biorigin
        • 貨號

          產品規格

          售價

          備注

        • BN20547-500ul/25T

          500ul/25T

          ¥2800.00

        • BN20547-1ml/50T

          1ml/50T

          ¥5200.00

        產品描述

        產品描述:偶聯 anti-mCherry 納米抗體的瓊脂糖珠用于免疫沉淀 mCherry 融合蛋白。 

        產品優勢 

        ? 沒有普通抗體的輕鏈和重鏈; 

        ? 高親和力:解離常數達 nM-pM 級別; 

        ? 高載量:20 ul 的 beads 懸液可以結合 2-10 ug mCherry 蛋白; 

        ? 較短的孵育時間,結合 30-120 min 即可; 

        應用范圍 

             可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色質免疫沉淀(ChIP)/RNA 結合蛋白免疫沉淀(RIP)、 酶活性測定、質譜分析等; 

        特異性 

             可以結合 mCherry,也可能結合 RFP,DsRed 等紅色熒光蛋白。 

        產品特性 

             存儲緩沖液:PBS(含有 20%乙醇)。 

             保存條件:可在 4℃保存至少 1 個月,在-20 度或-80℃保存 1 年,避免高速離心,干燥和反復凍融。 

        實驗原理

        image.png

        實驗步驟: 

        收集細胞: 

             每個免疫沉淀反應大約使用 106-107 的哺乳動物細胞(約一個 10 厘米培養皿)表達綠色熒光蛋白融合蛋白。吸出生長培養基、向培養皿中加入 2 毫升預冷的 PBS 洗滌細胞 2 次,利用細胞刮或胰酶消化的方法收集貼壁細胞,細胞轉移到離心管, 500 g 離心 3-5 分鐘并丟棄上清液。 

        細胞裂解: 

             1.用 500 ul 預冷的裂解緩沖液重懸細胞,在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑(自備)。對于膜蛋白或核/染色質蛋白, 可使用 RIPA 裂解液(貨號:BN25012)中加入蛋白酶抑制劑(貨號:BN25002)。 

             2.把離心管放置在冰上 30 分鐘,可以每 10 分鐘充分吹打一次。 

             3.細胞裂解產物在 4℃,20,000 g 條件下離心 15 分鐘,轉移裂解產物到一個新的預冷管中,丟棄沉淀。注意:此時細胞 裂解產物可以放在-80℃進行長期儲存。 

        平衡珠子: 

             4.振蕩混勻 mCherry-Nanobody-Agarose Beads 懸液,吸取 20ul beads 懸液到 500 ul 預冷的裂解緩沖液中,在 4 ℃, 2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。(此步驟可選) 

        結合蛋白

             5. 將細胞裂解產物加入到平衡的 mCherry-Nanobody-Agarose Beads 懸液中(如果未做第 4 步,可在細胞裂解產物中直 接加入 20ul beads 懸液),在 4 ℃冷柜中的旋轉混合儀上結合 30-120 min。如果需要,保存 50 ul 的裂解產物進行免疫 印跡分析。 

             6. 在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。 

        清洗珠子: 

             7. 用 500 ul 預冷的裂解緩沖液中洗滌 mCherry-Nanobody-Agarose Beads 懸液,在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘, 丟棄上清液并重復洗滌 2 次。(可選:在第二次洗滌的步驟中增加鹽濃度到 500 mM)。 

        洗脫蛋白: 

        方法一: 

             8. 加入 20ul 2X SDS-sample buffer 重懸 mCherry-Nanobody-Agarose Beads 懸液。在 95℃條件下加熱 10 min,把免 疫沉淀復合物從珠子上游離出來,然后在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘收集上清,進行免疫印跡分析。 

        方法二: 

             9. 替代步驟 8 的可選步驟:加入 50ul 0.2 M pH2.5 的甘氨酸洗脫結合的蛋白,建議孵育時間 30 秒,并不斷混勻,隨后 離心,轉移上清液到新管中,為了中和酸性的甘氨酸,需添加 5ul 1.0 M Tris(pH10.4)。注意:為了提高洗脫效率可 以重復這一步。 

        產品效果:

        image.png

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